Uma beta-1,3-glucanase foi produzida por Trichoderma harzianum em cultura contendo quitina como fonte de carbono. Duas proteínas com atividade de beta-1,3-glucanase foram purificadas através de cromatografia de interação hidrofóbica. As massas moleculares destas proteínas foram de 29 kDa e 36 kDa. A proteína de 36 kDa foi caracterizada quanto à influência das condições de pH e temperatura. A atividade máxima foi encontrada em pH 5,0 e temperatura de 50ºC. A proteína purificada mostrou-se muito sensível à temperatura. Aproximadamente 60% da atividade original foi perdida por incubação da proteína a 45ºC, 50ºC e 60ºC, por 30 min. O K M aparente e a Vmax para hidrólise de laminarina em pH 5,0 à 37ºC, foram de 0,099 mg de açúcar redutor/mL e 0,3 mg de açúcar redutor/min.mL, respectivamente. Esta enzima mostrou-se insensível a compostos orgânicos e íons metálicos, exceto íon férrico o qual em uma concentração de 1 mM, inibiu em aproximadamente 100% a atividade da enzima. Ao contrário de outras enzimas hidrolíticas (quitinase e protease) produzidas pelo mesmo isolado 1051 de T. harzianum, a beta-1,3-glucanase descrita aqui não afetou a integridade da parede celular do fitopatógeno Crinipellis perniciosa.

A beta-1,3-glucanase was produced by Trichoderma harzianum in cultures containing chitin as the sole substrate. Two proteins showing beta-1,3-glucanase activity were purified to apparent homogeneity by hydrophobic chromatography. The molecular masses of these proteins were 29 and 36 kDa. The 36 kDa protein was further characterized. It was active on a broad pH range, and maximal activity was detected at pH 5.0. The optimum temperature of the 36 kDa beta-1,3-glucanase was 50ºC, but the purified enzyme was very sensitive to temperature. It lost about 60% or more of the activity after incubation for 30 min at 45, 50 and 60ºC. The apparent K M and Vmax for hydrolysis of laminarin at pH 5.0 and 37ºC, were 0.099 mg of reducing sugar/mL and 0.3 mg of reducing sugar/min.mL, respectively. The enzyme was insensitive to organic compound and metal ions, except for the ferric ion which inhibited about 100% of the original activity at the concentration of 1 mM. In contrast to other hydrolytic enzymes (a chitinase and a protease) produced by the same T. harzianum isolate (1051), the beta-1,3-glucanase showed no effect on the cell wall of the phytopathogenic fungus Crinipellis perniciosa.

O fungo termofílico Aspergillus fumigatus secreta as enzimas invertase (beta-frutofuranosidase) e alfa-galactosidase (alfa-D-galactosídeo galactohi-drolase) que estão envolvidas na hidrólise completa dos oligossacarídeos de rafinose. A enzima alfa-galactosidase foi produzida em meio de cultura do fungo Aspergillus fumigatus crescido por 36 h a 42 °C em meio mineral mínimo contendo os açúcares galactose, ou melibiose, ou rafinose como fontes de carbono. A enzima foi purificada por filtração em gel, seguida por duas cromatografias de troca iônica. A massa molecular da alfa-galactosidase determinada por SDS-PAGE foi de 54,7 kDa. A atividade máxima da enzima purificada, utilizando o substrato ro-nitrofenil-alfa-D-galactopiranosídeo (roNPGal) foi na faixa de pH entre 4,5 e 5,5 e a 55 °C. A enzima manteve aproximadamente 80% de sua atividade original mesmo após pré-incubação por 90 minutos a 50 °C. O valor de KM para o substrato roNPGal foi 0,3 mM. A enzima foi capaz de hidrolisar melibiose, mas sua atividade foi muito reduzida na presença do substrato rafinose.

Aspergillus fumigatus secreted invertase (beta-fructofuranosidase) and alpha-galactosidase enzymatic activities able to hydrolyzing raffinose oligosaccharides (RO). alpha-Galactosidase was induced by galactose, melibiose and raffinose, but galactose was the most efficient inducer. It was purified by gel filtration and two ion exchange chromatographies and showed Mw of 54.7 kDa. The purified enzyme showed maximal activity against p-nitrophenyl-alpha-D-galactopyranoside (pNPGal) at pH 4.5-5.5 and 55 °C, and retained about 80% of the original activity after incubation for 90 minutes at 50ºC. The KM for pNPGal was 0.3 mM. Melibiose was hydrolyzed by the enzyme but raffinose was very poor substrate.

Dois isolados de Trichoderma os quais reduzem a incidência da doença "vassoura-de-bruxa", causada em plantações de cacau pelo fungo Crinipellis perniciosa, foram avaliados quanto ao seu potencial de produção de hidrolases em meio líquido. Na ausência de qualquer substrato nenhuma atividade hidrolítica foi produzida. As atividades de quitinase, N-acetilglicosaminidase, beta-1,3-glucanase, celulase total, endoglucanase, aril-beta-glucosidase, beta-glucosidase, protease e amilase aumentaram significativamente durante o crescimento dos isolados em meio líquido contendo os respectivos substratos. As maiores atividades foram encontradas nos tempos de 72 a 120 horas de crescimento. Com exceção das enzimas N-acetilglicosaminidase e beta-glucosidase, os maiores níveis de hidrolases foram encontrados nas culturas do isolado 1051 de Trichoderma harzianum. O possível envolvimento destas enzimas na interação antagonística entre Trichoderma e C. perniciosa é discutido.

Two isolates of Trichoderma, which reduce the incidence of witches'broom disease caused in cocoa by Crinipellis perniciosa, were evaluated for their potential to produce hydrolases in liquid medium. Very low or no hydrolytic activity was produced in the absence of any substrate. The activities of chitinase, N-acetylglucosaminidase, beta-1,3-glucanase, total cellulase, endoglucanase, aryl- beta-glucosidase, beta-glucosidase, protease and amylase increased dramatically within 72-120 h of growth in the presence of specific substrates. Except for N-acetylglucosaminidase and beta-glucosidase Trichoderma harzianum isolate 1051 produced the largest amounts of hydrolases. The possible involvement of these enzymes in the antagonistic interaction between Trichoderma and C. perniciosa is discussed.